Святой Иосафат (крестное имя Иоанн) родился в 1580 году в городе Владимире на Украине. Однажды в храме святой Параскевы, куда он пришел еще маленьким ребенком вместе с родителями, он увидел икону распятого Иисуса. Мальчик с интересом спросил своей матери, что изображено на иконе. Она объяснила ему, что это Спаситель мира, который из любви к людям сошел с неба на землю и умер за них позорной смертью, чтобы спасти их от вечного осуждения в аду, открыв им небесные врата. Тогда мальчик загорелся искренней любовью к Иисусу. Позже он сказал своему другу: «В тот момент я почувствовал, как из ребра Распятого вылетела горящая искра и упала в мое сердце».

В 1604 году он вступил в монастырь в Вильнюсе и получил монашеское имя Иосафат. Вильнюсский монастырь был в упадке и практически пустой, так что Иосафату не оставалось ничего другого, как быть ведомым Духом Святым. Он вскоре привел его к святости. Кроме ежедневных молитв, Иосафат вставал и в полночь и несколько часов молился в своей келье или на ближайшем кладбище, и даже зимой, на ветру, часто стоя босиком на снегу.